產(chǎn)品名稱:嘔吐毒素免疫親和柱
產(chǎn)品品牌:HPSW
產(chǎn)品貨號:06995-2530
產(chǎn)品規(guī)格:3ml
【概要】
脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol, DON) 又稱嘔吐毒素(vomitoxin),主要是由鐮刀菌的某些種產(chǎn)生的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性相似的有毒代謝產(chǎn)物——單端孢霉烯族化合物中的一種。廣泛存在于全球,主要污染小麥、大麥、玉米等谷類作物,也污染糧食制品,人和動物在誤食被該毒素污染的糧谷類后可以產(chǎn)生廣泛的毒性效應(yīng)。DON最明顯的毒性作用是引起嘔吐、腹瀉、腹痛等癥,并延緩生長、降低免疫機(jī)能,與貧血、免疫抑制、食管癌、克山病也具有密切聯(lián)系。給人、家畜的健康造成巨大威脅。
【適用范圍及性能】
用于定性、定量檢測谷物、酒類等食品和飼料等樣本中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇時的樣品前處理。
柱容量:≥2500ng
回收率:≥85%
【試驗原理】
本產(chǎn)品的測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),脫氧雪腐鐮刀菌烯醇單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上,樣品中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇經(jīng)過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢的通過玉米赤霉烯酮免疫親和層析柱,在免疫親和柱內(nèi),脫氧雪腐鐮刀菌烯醇與抗體結(jié)合,之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫脫氧雪腐鐮刀菌烯醇,然后注入到分析儀器中用于檢測。
【包裝組成】
25支/盒,3mL柱管/支
產(chǎn)品說明書1份
【需要而未提供的設(shè)備及試劑】
設(shè)備:
┅┅高速均質(zhì)器或組織勻漿機(jī)
┅┅粉碎機(jī)
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天平:感量0.1g
┅┅微量移液器:單道 100μl~1000μl
┅┅槽紋濾紙(折疊快速定性或定量濾紙)
┅┅玻璃微纖維濾紙(1.5μm孔徑)
┅┅50ml漏斗
┅┅一次性玻璃試管
┅┅泵流操作架(包括空氣泵,不同容積的玻璃注射器等)
試劑:
┅┅蒸餾水或去離子水
┅┅聚乙二醇(PEG)8000
┅┅色譜級甲醇
┅┅pH7.0磷酸鹽緩沖溶液(PBS):稱取8.0g氯化鈉,1.2g磷酸氫二鈉,0.2g磷酸二氫鉀,0.2g氯化鉀,用990mL純水溶解,然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0,最后用純水稀釋至1000mL
【樣本處理步驟】
(一)花生,玉米,大米,小麥及其制品和飼料(稀釋倍數(shù)2)
┅┅稱取25g粉碎的樣品于100ml容量瓶中,加入10g聚乙
二醇8000后,用去離子水定容;
┅┅轉(zhuǎn)移至均質(zhì)杯中,均質(zhì)器高速均質(zhì)2分鐘;
┅┅4000r/min離心5min或用定量濾紙過濾,取上清液,使
用玻璃纖維濾紙過濾后待用;
┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取2mL上述樣品提取液注入玻璃注射器;
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/s流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;
┅┅以5.0mLPBS溶液和去離子水快速淋洗柱子1次,流速為2-3滴/秒。棄去全部流出液,并使2mL~3mL空氣通過柱體;
┅┅準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫,流速為1 滴/S,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測用。
(二)酒類(稀釋倍數(shù)0.5)
┅┅取脫氣酒類試樣(含二氧化碳的酒類樣品使用前先置于4℃
冰箱冷藏30min,過濾或超聲脫氣)或其他不含二氧化碳的
酒類試樣20g(精確到0.01g),加人1g聚乙二醇(4.3),用水定
容至25.0mL,混勻,
┅┅用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清
┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取2mL上述樣品提取液注入玻璃注射器;
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/s流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;
┅┅以5.0mLPBS溶液和去離子水快速淋洗柱子1次,流速為2-3滴/秒。棄去全部流出液,并使2mL~3mL空氣通過柱體;
┅┅準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫,流速為1 滴/S,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測用。
【結(jié)果判定】
經(jīng)免疫親和柱凈化后,收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計或者HPLC檢測,也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行檢測。也可氮氣吹干后,復(fù)溶以提升濃度(稀釋倍數(shù)相應(yīng)變化)。
【注意事項】
┅┅嘔吐毒素危害很大,應(yīng)戴手套操作。
┅┅不要使用過了有效日期的免疫親和柱。
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件:
親和柱2-8℃
保存,不可凍存
保存期:該產(chǎn)品有效期為12個月。